1 取样前准备工作

1.1 依据检测区域的取样点数，按照《培养基配制、灭菌标准操作程序》制备适量的营养琼脂培养基。

1.2 在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15ml的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。

1.3 将制备的营养琼脂平皿倒置于隔水式恒温水浴培养箱内于30～35℃培养48小时。取出逐个检查，确认无菌落数后即可使用。

1.4 采样：将上述制备好的营养琼脂平皿交与QA人员取样。

2 仪器、设备和培养基

2.1 所用的仪器、设备和培养基

2.1.2 浮游菌采样器

2.1.3 培养皿（φ90mm×15mm）

2.1.4 培养基（营养琼脂培养基）

2.1.5 恒温培养箱

2.2  仪器、设备、培养基的要求

2.2.1  浮游菌采样器

2.2.1.1 浮游菌采样器须要有流量计和定时器。

2.2.1.2 应严格按仪器说明书的要求进行操作。

2.2.1.3 浮游菌采样器须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性，检验项目有：定时器，转盘转速，流量计。

2.2.1.4 每次测试前应先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计和定时器。2.2.1.5 空气采样量根据需要选定，已知采样器的流量（L/min）,设定采样时间（min）两者相乘即得采样量（L）。

2.2.1.6 采样口须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造，采样管严禁渗漏，内壁应光滑，采样管的长度应根据测定点的高度定，尽量减少弯曲。

3 测试方法

3.1  测试用仪器、培养皿表面须严格消毒。

3.1.1  采样器进入被测房间前先用消毒剂灭菌。

3.1.2  用消毒剂擦净培养皿的外表面。

3.1.3  采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盘、转盘以及罩子的内外面，采样结束再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。

3.1.4  采样口及采样管使用前须高温灭菌，如用消毒剂对采样管的外壁、内壁进行消毒，应将管中的残留液倒掉并晾干。

3.1.5  采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。

3.2  采样程序

3.2.1  仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。

3.2.2  关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样品缝隙高度。

3.2.3  置采样器于采样点后，开启采样器、转动定时器，根据采样量设定采样时间。

4 测试规则

4.1 测试状态

4.1.1  浮游菌测试前微生物限度检查室已经消毒过。

4.1.2  测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。

4.2 测试人员

4.2.1  测试人员须穿戴符和被测环境级别的工作服。

4.2.2  静态测试时，室内人员不得多于2人。

4.3 测试时间

4.3.1  对单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。

4.3.2  对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。

4.4  采样点数目及其布置，小采样量，见下表：

4.4.1  工作区测点位置离地0.8m～1.5m左右，送风口测点位置离开送风面30cm左右；可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。

4.4.2  每个采样点一般采样一次。

4.4.3  对于单向流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流，采样管口向上。

4.4.4  布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上。

4.4.5  采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。

5 培养取样结束后将平皿复倒置隔水式恒温水浴培养箱内于30～35℃培养48小时。并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。

6 菌落计数

6.1 用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，是否遗漏。

6.2 若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时，仍以2个或2个以上的菌落计数。计数：培养结束，将上述培养后的平皿取出，逐个点计菌落数，必要时用放大镜检查，并记录。